徐乐勤1,2,李晓锋2,施杞2,王拥军2,周重建2
XU Le-qin1,2, LI Xiao-feng2, SHI Qi2, WANG Yong-jun2, ZHOU Chong-jian2
摘要: 目的观察过表达Mash-1 基因的胚胎干细胞在脊髓损伤部位向神经细胞分化的情况及其对脊髓神经损伤的修复作用。方法采用鼠干细胞病毒将Mash-1 基因转染CE3 小鼠胚胎干细胞稳转株。4 周龄雄性SPF 级昆明小鼠钳夹法建立急性脊髓损伤模型。造模后3 d 向脊髓损伤部位注射生理盐水(模型组, n=12)、CE3 胚胎干细胞(CE3 组, n=12)、转染Mash-1 基因的CE3 小鼠胚胎干细胞(CE3-Mash-1 组, n=12)。术后1 d、7 d、14 d、21 d、28 d 检测小鼠后肢功能评分。术后14 d、28 d 分别处死小鼠,HE染色观察脊髓剩余面积;CE3 组、CE3-Mash-1 组行Oct3/4、nestin、β-tubulinⅢ、神经胶质酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色,观察移植细胞的分化。结果与模型组比较,移植CE3 和CE3-Mash-1 细胞的小鼠运动功能均提高(F>84.471, P<0.05),脊髓剩余面积增加(F>49.990, P<0.05)。与移植CE3 细胞相比,移植CE3-Mash-1 细胞在损伤的脊髓部位Oct3/4 阳性细胞数显著减少(t=5.439, P<0.001),而nestin (t=-7.536, P<0.001)和β-tubulin Ⅲ (t=-9.941, P<0.001)阳性细胞数显著增加,GFAP 阳性细胞数无显著性差异(t=1.701, P=0.120)。结论过表达Mash-1基因可促进CE3 细胞在脊髓损伤部位分化成神经元,促进小鼠后肢运动功能的恢复。